抗酸染色法acidfaststainingmethod1882年由埃利希(FEhrlich)首创并经F齐尔(Ziehl)改进而创造出的细菌染色法。
其中最具代表性的为对结核菌的齐尔尼尔森(ZiehlNeelsen)染色法和齐尔加贝特(ZiehlGabbet)染色法。用石炭酸复红染色后,用盐酸乙醇分色,再用美蓝进行对比染色,即不再脱色而呈现石炭酸复红的红色。
抗酸染色的原理
分枝杆菌的细胞壁内含有大量的脂质,包围在肽聚糖的外面,所以分枝杆菌一般不易着色,要经过加热和延长染色时间来促使其着色。但分枝杆菌中的分枝菌酸与染料结合后,就很难被酸性脱色剂脱色,故名抗酸染色。
齐尼氏抗酸染色法是在加热条件下使分枝菌酸与石炭酸复红牢固结合成复合物,用盐酸酒精处理也不脱色。当再加碱性美兰复染后,分枝杆菌仍然为红色,而其他细菌及背景中的物质为蓝色。
抗酸染色一般步骤
1)初染
用玻片夹夹持涂片标本,滴加石炭酸复红23滴,在火焰高处徐徐加热,切勿沸腾,出现蒸汽即暂时离开,若染液蒸发减少,应再加染液,以免干涸,加热35分钟,待标本冷却后用水冲洗。
2)脱色
3盐酸酒精脱色30秒1分钟;用水冲洗。
3)复染
用碱性美兰溶液复染1分钟,水洗,用吸水纸吸干后用油镜观察。
抗酸染色的染液配制
1、石炭酸复红
碱性复红酒精饱和溶液10mL
5石炭酸90mL
2、3盐酸酒精
浓盐酸3mL
95酒精97mL
3、吕氏美兰液
美兰酒精饱和液30mL
氢氧化钾(1:10000)100mL
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