免疫PCR(ImmunoPCR,ImPCR)是利用抗原抗体反应的特异性和PCR扩增反应的极高灵敏性而建立的一种微量抗原检测技术。
定义
用抗体检测抗原是免疫学的最基该方法,用酶或同位素标记抗体可使检测的敏感性提高,常用的定量检测方法ELISA和RIA均基于标记分子可以使检测的信号增强。免疫PCR是在ELISA的基础上建立起来的新方法,用PCR扩增代替ELISA的酶催化底物显色。PCR具有很强的放大能力,其可以定量地检测DNA和RNA,具有非常高的敏感性和特异性,因此,将与抗原结合的特异抗体通过连接分子与DNA结合,再经PCR扩增,由此定量检测抗原使敏感性高于ELISA和RIA。
基本原理
概述
免疫PCR主要由两个部分组成,第一部分的免疫反应类似于普通的酶联免疫吸附试验(ELISA)的测定过程;第二部分即通常的PCR检测,抗原分子的量最终由PCR产物的多少来反映。第一步中,首先用待测抗原(如牛血清白蛋白(BSA))包被微滴板孔,再加入相应的特异抗体,于是抗体就与固相上的抗原结合形成抗原抗体复合物,蛋白A链亲合素(ProteinAStreptavidin)嵌合体(重组融合蛋白)中的蛋白A部分可与固相上抗原抗体复合物中的抗体IgG结合,而链亲合素部分可与生物素化的pUC19(质粒DNA)(BiotinpUC19)中的生物素反应,从而将特定的DNA间接吸附于固相。接下来,就是第二步中的PCR过程,第一步中吸附于固相的pUC19质粒DNA在相应的引物存在下,可经PCR在几小时内而放大数百万倍,PCR产物的多少与固相上抗原的量成正比。
PCR由待测抗原;生物素化抗体;亲和素(连接分子);生物素化DNA;PCR扩增五部分构成。
待检抗原
被检测的样品可以是抗原,或者是作为抗原的某种抗体。待检的抗...
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