简并序列在分子生物学研究中,基因克隆和分子杂交的探针制备等操作常需分离与已知RNA序列邻近的未知序列,TAILPCR又叫热不对称交错PCR,能够较好地解决上述难题。该技术通过3个嵌套的特异性引物分别和简并引物组合进行连续的PCR循环,利用不同的退火温度选择性地扩增目标片段,所获得的片段可以直接用做探针标记和测序模板。
定义
分子生物学中,同一种氨基酸具有两个或更多个密码子的现象称为密码子的简并性(degeneracy)。这样的序列就叫简并序列。
简并序列在分子生物学研究中,基因克隆和分子杂交的探针制备等操作常需分离与已知RNA序列邻近的未知序列,TAILPCR又叫热不对称交错PCR,能够较好地解决上述难题。该技术通过3个嵌套的特异性引物分别和简并引物组合进行连续的PCR循环,利用不同的退火温度选择性地扩增目标片段,所获得的片段可以直接用做探针标记和测序模板。
TAILPCR技术简单易行,反应高效灵敏,产物的特异性高,重复性好,能够在较短的时间内获得目标片段,已经成为分子生物学研究中的一种实用技术。经改良过的TAILPCR成功地从突变体中克隆到外源插入基因的旁侧序列,从而为启动子的克隆提供了有效的新方法。
构成
在利用特异引物和随机引物进行PCR中一般有3种产物生成:
由特异性引物和简并引物扩增出的产物;
由同一特异性引物扩增出的产物;
由同一简并引物扩增出的产物。
在TAILPCR反应中,其中后2种目标产物可以通过以嵌套的特异性引物进行的后续反应来消除。TAILPCR的基本原理是利用目标序列旁的已知序列设计3个嵌套的特异性引物(specialprimer,简称sp1,sp2,sp3,约20bp),用它们分别和1个具有低Tm值的短的随机简并引物(arbitrarydegenera...
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