RAW264。7细胞培养传代及冻存处理

　　RAW264。7小鼠单核巨噬细胞取材于Abelson小鼠白血病病毒诱发的肿瘤组织，是科研上常用的炎症细胞模型之一。RAW264。7细胞系是合适的转染宿主。细胞将胞饮中性红并吞噬乳胶珠和酵母聚糖。它们能够依赖抗体对绵羊红细胞和肿瘤细胞靶标进行裂解。LPS或PPD治疗2天会刺激红细胞裂解，但不会刺激肿瘤细胞靶标。RAW264。7细胞培养传代及冻存处理
　　RAW264。7细胞培养实验准备
　　提前开启紫外照射30min消毒灭菌，工作台开灯通风10min，用75酒精擦拭台面RAW264。7细胞培养所需试剂物品
　　培养基：DMEM10FBSPS、培养皿、无血清冻存液等
　　培养条件气相：95空气5二氧化碳；温度：37RAW264。7细胞复苏操作
　　a、将含有1mLRAW264。7细胞悬液的冻存管在37水浴中迅速摇晃解冻，加4mL培养基混合均匀。
　　b、在1000rpm条件下离心3min，弃去上清液，加12mL培养基后吹匀。
　　c、然后将所有细胞悬液加入含适量培养基的培养瓶中培养过夜（或将细胞悬液加入6cm皿中，加入约4mL完全培养基，培养过夜）。第三天换液并检查细胞密度。RAW264。7细胞传代处理
　　传代密度：如果细胞密度达8090，即可进行传代培养
　　传代：1：2至1：3每周3次RAW264。7细胞传代实验步骤
　　a、弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1次。
　　b、加2mL预冷的PBS溶液于培养瓶中，使PBS溶液浸润所有RAW264。7细胞，然后轻轻吹下细胞，将吹下来的细胞及细胞悬液收集到无菌离心管中，1000rpm离心5min，弃去上清液，补加12mL培养液后吹匀。
　　c、将RAW264。7细胞悬液按1：2比例分到新的含8mL培养基的新皿中或者瓶中，置于培养箱中培养。RAW264。7细胞冻存处理
　　冻存条件：无血清冻存液，液氮储存
　　细胞冻存：待细胞生长状态良好时，可进行细胞冻存。下面T25瓶为例RAW264。7细胞冻存实验步骤
　　a、收集RAW264。7细胞及细胞培养液，装入无菌离心管中，1000rpm条件下离心4min，弃去上清液，用PBS清洗一遍，弃尽PBS，进行细胞计数。
　　b、根据RAW264。7细胞数量加入无血清细胞冻存液，使细胞密度51061107mL，轻轻混匀，每支冻存管冻存1mL细胞悬液，注意冻存管做好标识。
　　c、将冻存管放入80冰箱，24h后转入液氮灌储存。记录冻存管位置以便下次拿取。RAW264。7细胞培养注意事项
　　1。运输用的培养基（灌液培养基）不能再用来培养细胞，请换用按照说明书细胞培养条件新配制的完全培养基来培养细胞。
　　2。收到细胞后第一次传代建议1：2传代，1：2传代就是1个T25瓶传2个T25瓶或者2个6cm皿。不是1个T25瓶传2个10cm皿